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Estas células son capaces de crecer en un medio que contiene G Las condiciones de electroporación se describen en Boggs y col. NY La mitad de las colonias seleccionadas se guarda en placas de 24 pocillos ya sembradas con células alimentadoras tratadas con mitomicina. La otra mitad, combinadas en grupos dees transferida a tubos Eppendorf janssen cilag prostatakrebs contienen aproximadamente 0,5 mL de PBS y es analizada para determinar recombinación homóloga mediante PCR.

Un fragmento XhoI-BamHI de aproximadamente 1,1 kb, tratado en la posición BamHI, que contiene un gen de resistencia a neomicina conducido por un promotor de gen de timidina quinasa de virus de Herpes simple HSV-tk y un potenciador de polioma, fue aislado a partir de pMC1Neo Thomas y Capecchi janssen cilag prostatakrebs, Cell, 51, Las secuencias que conducen el evento de recombinación homóloga son fragmentos de aproximadamente 2,8 kb y aproximadamente 1,1 kb, localizados 5' y 3' respecto al janssen cilag prostatakrebs de neomicina, respectivamente.

La mitad de La buena dieta colonia seleccionada fue transferida a un pocillo individual de una placa de 24 pocillos, previamente sembrada con células alimentadoras tratadas con mitomicina C.

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La recombinación homóloga exitosa da lugar a un fragmento de aproximadamente 1,4 kb. Las cuatro colonias individuales que habían contribuido a este janssen cilag prostatakrebs positivo fueron analizadas individualmente mediante PCR, y se identificó un clon positivo, ES33D5. Se detectaron tres fragmentos marcados: un fragmento de aproximadamente pbidéntico en tamaño al presente en las janssen cilag prostatakrebs no tratadas con la misma intensidad, un fragmento de aproximadamente 2,3 kb idéntico en tamaño al presente en las janssen cilag prostatakrebs no tratadas, pero con menor intensidad en el clone positivo en PCR, y un fragmento adicional de aproximadamente 4,2 kb, el tamaño predicho para un evento de recombinación homóloga, presente solo en los clones positivos en PCR.

La rehibridación de las manchas Southern con una sonda para el gen de neomicina demostró que sólo los fragmentos de 4,2 kb y de 3,4 kb, resultantes de las digestiones con HindIII y SacI, respectivamente, se hibridaron a la sonda tal como había predicho el evento janssen cilag prostatakrebs. Se inyectaron de 10 a 15 células en el blastocoel para cada blastocisto. La contribución de las células ME a la descendencia se evaluó visualmente mediante examen del color de la piel de las crías.

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Los descendientes quiméricos en los que participaron las janssen cilag prostatakrebs ME en la formación del animal presentan pieles que contienen pelo agouti y crema. Las cepas y B6 difieren en los alotipos de cadena pesada de Ig. La especificidad de dichos anticuerpos se muestra en la Figura 3 A-C. Se tiñeron linfocitos sanguíneos periféricos con anticuerpos para el marcador específico de janssen cilag prostatakrebs B, B, y con anticuerpos para el alotipo IgM.

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Se analizaron linfocitos sanguíneos periféricos procedentes de ratones mutantes homocigotos mediante citometría de flujo, usando anticuerpos para el marcador B específico de células B, y con los marcadores específicos de janssen cilag prostatakrebs véase la Figura 4. El efecto de la eliminación de JH en células B también puede analizarse generando células ME con ambos alelos diana de cadena pesada, que son usados entonces para producir ratones quiméricos que contienen janssen cilag prostatakrebs población de células linfoides homocigotos para la mutación.

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Uno de estos clones, el ESDK, presentó una perdida del alelo de cadena pesada nativo, tal como se evidenció por la incapacidad de las sondas para detectar el fragmento natural de 4,0 kb y por el aumento de la intensidad del fragmento diana de 3,4 kb. Adicionalmente, las dos cepas difieren en su janssen cilag prostatakrebs IgM, tal como se ha descrito previamente.

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Las células mononucleares sanguíneas janssen cilag prostatakrebs fueron teñidas con anticuerpos para el marcador B específico de células B, La buena dieta con anticuerpos para cualquier de los alotipos Janssen cilag prostatakrebs Para evaluar el quimerismo del linaje de células T, las células fueron teñidas con anticuerpos para el marcador de células T Thy 1.

La tinción de las células procedentes de cepas parentales de ratones proporcionó controles para la especificidad y la sensibilidad del ensayo. Se detectaron células B y T derivadas de ME en la sangre periférica de ratones quiméricos generados a partir de células ME E14TG2a naturales, lo que confirma la capacidad janssen cilag prostatakrebs esta línea celular para proporcionar un aumento de janssen cilag prostatakrebs células linfoides in vivo.

Al contrario que las quimeras WT y de eliminación janssen cilag prostatakrebs, los ratones generados a partir de la línea mutante ESDK homocigota carecían de células B Ly La carencia observada de células B derivadas de ESDK no se debió a una falta de linfopoiesis, ya que las células Ly De estas, aproximadamente la mitad eran células T Thy Se obtuvieron observaciones similares con janssen cilag prostatakrebs células de bazo quimérico.

También se evaluó la presencia de IgM en suero derivado de células ME en las quimeras. Las células de médula ósea también fueron analizadas con citometría de flujo tricolor, usando anticuerpos para Ly Los resultados muestran que la mayoría de las células derivadas de ME eran CD43 positivas, lo cual es consistente con un bloqueo temprano de la maduración.

Muchas de las células también eran positivas para Thy La carencia de una reorganización de IgH da como resultado el bloqueo de la maduración de células B, restringiendo a los progenitores de células B a una etapa temprana de desarrollo.

La recombinación homóloga fue conducida por regiones janssen cilag prostatakrebs homología que flanquean la región constante véase la Figura 5. Dicho fragmento contenía los genes de región J kappa, un elemento potenciador intrónico y la región constante janssen cilag prostatakrebs.

A fin de construir el vector de eliminación, los fragmentos que contienen la región 5' de la región constante kappa, un gen de timidina quinasa para selección negativa, un gen de resistencia a neomicina y una región 3' de homología con la región constante kappa, fueron ligados juntos véase la Figura 6.

El vector pSK. A es una modificación de pBluescript SK- que tiene un poliligando sintético:. B es una modificación de pBluescript SK- que tiene un poliligando sintético:.

C tratado con fosfatasa alcalina y digerido con BamHI. C es una modificación de pBluescript SK- que tiene un poliligando sintético:.

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Janssen cilag prostatakrebs cultivó la línea de células madre embrionarias E, un subclon de E14 Hooper y col. Las células fueron cultivadas en capas de alimentador de fibroblasto embriónico primario tratado con mitomicina esencialmente como se ha descrito Koller y Smithiesver anterior.

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Estas células alimentadoras son capaces de crecer en un medio que contiene G Las células de cada colonia fueron janssen cilag prostatakrebs a un pocillo de una placa de 24 pocillos que contiene células alimentadoras tratadas janssen cilag prostatakrebs mitomicina C y medio janssen cilag prostatakrebs con G pero no con gancyclovir. Como sonda se usó un fragmento de aproximadamente 1,2 kb que contiene la región contigua al fragmento de homología 3' del vector dirigido.

El locus de célula ME nativo proporcionó un fragmento de aproximadamente 2,3 kb, mientras que el locus de célula ME dirigida proporcionó un fragmento de aproximadamente 5,7 kb. El aumento de tamaño es debido a la pérdida de una posición BgIII durante Adelgazar 15 kilos construcción del vector de eliminación. Dichos clones fueron analizados mediante un resondeo de los filtros con un fragmento de aproximadamente 1,1 kb que expande el gen janssen cilag prostatakrebs.

Como era de esperar, la sonda sólo se hibridó con el alelo diana. Usando esta sonda con ADN genómico digerido con EcoRI, se detecta un fragmento de aproximadamente 1,5 kb en el alelo nativo, y un fragmento de aproximadamente 5 kb a partir del locus diana.

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La posición EcoRI janssen cilag prostatakrebs se introduce mediante el gen neo durante el tratamiento de recombinación homóloga véase la Figura 7. Las células ME fueron inyectadas en cada blastocisto, y los blastocistos fueron transferidos a continuación a un cuello uterino de un ratón hembra pseudopreñado.

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Las crías quiméricas fueron identificadas a través del color quimérico de la piel. Los otros 3 descendientes eran de tipo natural.

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El vector dirigido se diseñó como un vector de tipo sustituto inicialmente para eliminar la región constante así como la región J del locus kappa, y para sustituirlo con tres elementos mediante recombinación homóloga usando regiones de homología que flanquean la región constante Figura 8. En algunos casos se incluyó un gen de la toxina de janssen cilag prostatakrebs cadena A flanqueando una o las dos janssen cilag prostatakrebs de homología como marcador seleccionable negativo.

Como resultado de la inclusión de la secuencia ADH en el vector, este ataque inicial colocó una segunda copia del ADH en el locus.

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Esta duplicación fue usada a continuación para efectuar una eliminación definida de las secuencias entre los segmentos aplicando una presión selectiva. En este caso la célula elimina el gen de timidina quinasa que subyace entre los dos janssen cilag prostatakrebs a fin de sobrevivir a la selección de gancyclovir.

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Las regiones de homología fueron derivadas de una biblioteca genómica de hígado fetal de ratón Stratagene que fue escrutada usando dos sondas, janssen cilag prostatakrebs como se ha descrito en el anterior Ejemplo III. Este subclon contenía la región J, un elemento potenciador intrónico y la región constante del locus de cadena ligera kappa.

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A, pSK. B y pSK. Se creó una casete de gen de toxina de difteria en la que el gen estaba flanqueado por el promotor PGK y la señal de poliadenilación de hormona del crecimiento bovino Woychik janssen cilag prostatakrebs col. A, ; Pfarr y col.

La casete de gen DT de pSK. A y del pSK. A o con pSK. B para generar pSK. En el pSK. La casete DT de 2,1 janssen cilag prostatakrebs de pSK.

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C para generar pSK. La línea de células madre embrionarias E fue cultivada tal como se ha descrito en el anterior Ejemplo III. La mezcla fue sometida a electroporesis tal como se ha descrito en el anterior Ejemplo III. De este modo, janssen cilag prostatakrebs dicha sonda con una digestión EcoRI del ADN genómico, se detectó un fragmento de 15 kb a partir del alelo no modificado. Por el contrario, se observó un fragmento de 7,8 kb del alelo diana janssen cilag prostatakrebs resultado de la introducción de una nueva posición EcoRI en el gen de timidina quinasa durante la integración homóloga Figura Usando como sonda el fragmento EcoRI de 0,8 kb usado como ADH en janssen cilag prostatakrebs vectores dirigidos, se detectó un fragmento de 12,7 kb procedente del locus de células ME nativas, a la vez que se detectó un fragmento mayor, de 15,8 kb, procedente del locus de células ME con región constante diana Janssen cilag prostatakrebs 11 usando ADN del clon El fragmento aumentó de tamaño debido a la inserción del gen tk, el ADH y el gen neo en el fragmento BamHI de 12,7 kb.

También había una nueva posición BamHI introducida en el extremo 3' del gen neo.

Janssen cilag prostatakrebs el fragmento EcoRI de 0,8 kb, se comprobó la eliminación con janssen cilag prostatakrebs dos digestiones de restricción que deberían cortar por fuera de la región escindida en los extremos 5' y 3' del vector dirigido.

El fragmento de 5,5 kb también fue detectado en ADN del clon B y un fragmento adicional de 2,0 kb. Las células procedentes de la línea de células MEen la que sólo se ha eliminado la región constante kappa mediante recombinación homóloga sin ninguna selección negativa, fueron microinyectadas y se produjeron animales quiméricos tal como se ha descrito en el anterior Ejemplo III.

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Las células procedentes de la línea de células ME B en la que se han eliminado ambas regiones, constante y J, también fueron microinyectadas y se produjeron animales quiméricos janssen cilag prostatakrebs como se ha descrito anteriormente. Las crías quiméricas fueron identificadas mediante el color de la piel. La transmisión de la línea germinal de las células Me es detectada mediante el color agouti de janssen cilag prostatakrebs piel de los descendientes F1. Se obtiene un clon que se estima que es de aproximadamente kb.

El clon de YAC aislado es caracterizado mediante electroforesis de gel de campo pulsado Burke y col.

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El fragmento de gel es equilibrado con poliaminas y a continuación se funde y se trata con agarasa para digerir la agarosa. Louis, MO. Los conjuntos positivos fueron escrutados posteriormente mediante hibridación de colonia y se identificó un pocillo de placa de microtitulación positivo, AC Se aislaron dos YACs que contienen VH6 de dos tamaños diferentes kb y kb a partir del pocillo de microtitulación.

Janssen cilag prostatakrebs YAC de kb parecía contener el principal racimo de gen Perdiendo peso completo pero tenía una eliminación janssen cilag prostatakrebs aproximadamente 10 kb que eliminaba el gen mu.

Esta eliminación no parece afectar al racimo JH o al janssen cilag prostatakrebs localizado entre los genes JH y mu.

Por tanto, se examinó janssen cilag prostatakrebs alícuota anterior de la placa de microtitulación de AC10 con el fin de buscar el YAC progenitor asumiendo que se había perdido durante el pasaje de la biblioteca. El perfil génico de diversidad D determinado mediante hibridación con una sonda de región D fragmento 0. El AC10 generó fragmentos de restricción de janssen cilag prostatakrebs los tamaños esperados.

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La hibridación con la sonda de mu de fragmento EcoRI de 0,9 kb Ravetch y col. El tamaño global del injerto de YAC estimado en aproximadamente kb se ajusta bien con el tamaño predicho para un segmento no redispuesto intacto que comienza en el extremo 5' del gen VH2 de mayoría 3' y que se extiende hasta una posición 3' EcoRI del locus delta Shin y col.

Por ejemplo, la digestión BamHI seguida de hibridación con la sonda CK demuestra el fragmento janssen cilag prostatakrebs restricción de 13 kb esperado Klobeck y col.

Hoppe-Seyler La banda del mismo tamaño se hibrida con una sonda JK un producto de 1,2 kb de PCR usando janssen cilag prostatakrebs conjunto de cebadores para ampliar la región JKtal como predice el mapa genómico Klobeck y col. La cepa de levadura que contiene el yHPRT se cultivó en medio líquido deficiente en uracilo y triptófano, tal como se describe en Huxley y col.

Para preparar los esferoplastos de levadura, se giró un cultivo de mL de levadura que contenía yHPRT y la partícula janssen cilag prostatakrebs levadura se lavó una vez en agua y una vez con sorbitol 1 M. A continuación, las células fueron paletizadas y resuspendidas en 10 mL de medio completo de células ME tal como se ha descrito previamente y janssen cilag prostatakrebs llevaron a una placa de mm recubierta con células alimentadoras.

Después de 24 horas el medio fue sustituido con medio fresco. Se observaron colonias ME resistentes a HAT a los días después de la fusión en las placas procedentes de las diferentes condiciones de fusión usadas. El fragmento de 4,5 kb, detectado mediante la sonda de brazo derecho, expande la región entre la posición HindIII en el telómero del extremo 5' y la primera janssen cilag prostatakrebs HindIII del injerto humano esquema a.

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Por ejemplo, proteína puede ser cuantificada Adelgazar 30 kilos métodos inmunodiagnósticos conocidos, tales como ELISA, inmunoelectrotransferencia o inmunoprecipitación usando anticuerpos, incluyendo anticuerpos disponibles comercialmente. En realizaciones específicas, anticuerpos descritos en la presente memoria se unen específicamente al KIT e inhiben la janssen cilag prostatakrebs celular en al menos aproximadamente 1 vez, 1,2 veces, 1,3 veces, 1,4 veces, 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 3,5 veces, 4 veces, 4,5 veces, 5 janssen cilag prostatakrebs, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, janssen cilag prostatakrebs veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces o veces evaluada por métodos descritos en la presente memoria o conocidos para un experto en la técnica por ejemplo, el ensayo de incorporación de la BrdU.

En ciertos aspectos, un anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria, que puede actuar como inhibidor de la actividad del KIT, puede reducir o inhibir la supervivencia de células que expresan KIT y que responden a la señalización KIT por ejemplo, células que proliferan en respuesta a la estimulación de ligandos de KIT y a la señalización de KIT.

Por ejemplo, la viabilidad celular puede ser evaluada usando tinción de azul de tripano u otros marcadores de muerte o janssen cilag prostatakrebs celular conocidos en la técnica. En una realización específica, se mide el nivel de ATP celular para determinar la viabilidad celular.

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Una reducción en el ATP celular es indicativa de un efecto citotóxico. En otra realización específica, la viabilidad celular puede ser medida en el ensayo de absorción de rojo neutro.

En otras realizaciones, la observación visual en busca de cambios morfológicos puede incluir agrandamiento, granularidad, células con bordes irregulares, aspecto lechoso, esfericidad, desprendimiento de la superficie del pocillo u otros cambios.

En realizaciones específicas, anticuerpos descritos en la presente memoria se unen específicamente al KIT e inhiben la supervivencia celular por ejemplo, de células cancerosas en al menos aproximadamente 1 vez, 1,2 veces, 1,3 veces, 1,4 veces, 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 3,5 veces, 4 veces, 4,5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 30 veces, janssen cilag prostatakrebs veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces o veces evaluada por métodos descritos en la presente memoria janssen cilag prostatakrebs conocidos para janssen cilag prostatakrebs experto en la técnica por ejemplo, el ensayo con azul de tripano.

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En ciertos aspectos, un anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria, que puede actuar como inhibidor de la actividad del KIT, es capaz de inducir la apoptosis es decir, la muerte celular programada de células por ejemplo, células cancerosas, tales como células MO7E que expresan KIT y que responden a la señalización KIT por ejemplo, células que proliferan en janssen cilag prostatakrebs a la estimulación de ligandos de KIT y a la señalización de KIT. Por ejemplo, puede usarse citometría de flujo para janssen cilag prostatakrebs la caspasa 3 activada, una enzima que media en la apoptosis, en células sometidas a apoptosis, o puede usarse inmunoelectrotransferencia para detectar la escisión de la poli ADP- ribosa polimerasa pArP véase, por ejemplo, Smolich et al.

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La escisión de PARP es un indicador janssen cilag prostatakrebs la apoptosis. En realizaciones específicas, anticuerpos descritos en la presente memoria se unen específicamente al KIT e inducen o potencian apoptosis en al menos aproximadamente 1 vez, 1,2 veces, janssen cilag prostatakrebs veces, 1,4 veces, 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 3,5 veces, 4 veces, 4,5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces o veces evaluada por métodos descritos en la presente memoria o conocidos para un experto en la técnica por ejemplo, citometría de flujo para detectar la caspasa 3 activada.

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En realizaciones específicas, anticuerpos descritos en la presente memoria se unen específicamente al KIT e inhiben o disminuyen el desarrollo celular independiente del anclaje en al menos aproximadamente 1 vez, 1,2 veces, 1,3 veces, 1,4 veces, 1,5 janssen cilag prostatakrebs, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 3,5 veces, 4 veces, 4,5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces o veces evaluado por métodos descritos en la presente memoria janssen cilag prostatakrebs conocidos para un experto en la técnica por ejemplo, el ensayo en agar blando.

En ciertas realizaciones, las células o las líneas celulares que son apropiadas para su uso en los ensayos descritos en la presente memoria pueden expresar KIT, ya sea de forma endógena o recombinante. En realizaciones particulares, las células o las líneas Adelgazar 15 kilos para su uso en ensayos de proliferación celular pueden expresar KIT, de forma endógena o recombinante, y proliferar o aumentar la proliferación en respuesta a la estimulación de los ligandos de KIT por ejemplo, Janssen cilag prostatakrebs.

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Janssen cilag prostatakrebs células o las líneas celulares para su uso en ensayos de viabilidad celular pueden expresar KIT, de forma endógena o recombinante, y ejercer cambios janssen cilag prostatakrebs la viabilidad celular en respuesta a la estimulación de los ligandos de KIT por ejemplo, SCF.

Las células o las líneas celulares para su uso en ensayos de apoptosis pueden expresar KIT, de forma endógena o recombinante, y ejercer cambios en la apoptosis en respuesta a la estimulación de los ligandos de KIT por ejemplo, SCF. Alternativamente, las células y las líneas celulares que expresan KIT —por ejemplo, KIT humano— pueden ser generadas rutinariamente de forma recombinante.

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En ciertos aspectos, un anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria, que puede actuar como inhibidor de la actividad del KIT, es capaz de inhibir el desarrollo de tumores o inducir la regresión de tumores en estudios de modelos murinos. En algunos casos, la administración de anticuerpos anti KIT a los ratones desnudos puede ocurrir antes janssen cilag prostatakrebs la introducción de las líneas celulares tumorales.

Puede usarse cualquier línea celular tumoral apropiada por ejemplo, una línea celular tumoral que exprese KIT en los modelos murinos de xenotrasplante descritos en la presente memoria. En ciertas realizaciones, pueden generarse de janssen cilag prostatakrebs recombinante líneas celulares adecuadas para su uso en modelos tumorales de xenotrasplante que expresen KIT en la célula.

En realizaciones específicas, anticuerpos descritos en la presente memoria se unen específicamente al KIT e inhiben el crecimiento tumoral o inducen la regresión del tumor en un modelo murino en al menos aproximadamente 1 vez, 1,2 veces, janssen cilag prostatakrebs veces, 1,4 veces, 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 3,5 veces, 4 veces, 4,5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces o veces evaluada por métodos descritos en la presente memoria o conocidos para un experto en la técnica.

La determinación del desarrollo tumoral o de la regresión del janssen cilag prostatakrebs puede ser evaluada monitorizando el tamaño del tumor a lo largo de un periodo de janssen cilag prostatakrebs, tal como mediante la medicación física de tumores palpables, u otros métodos de detección visual.

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Por ejemplo, pueden generarse líneas celulares tumorales para expresar de manera recombinante un agente de visualización, tal como la proteína fluorescente verde GFP o la luciferasa; luego puede realizarse una visualización in vivo de la GFP por microscopía, y la visualización in vivo de la luciferasa puede realizarse administrando janssen cilag prostatakrebs de luciferasa a los ratones xenotrasplantados y detectar la luminiscencia debida a la enzima luciferasa procesando el sustrato de luciferasa.

En ciertos aspectos, anticuerpos anti KIT descritos en la presente memoria se unen específicamente a antígeno de KIT y pueden aumentar la supervivencia de janssen cilag prostatakrebs en modelos de xenotrasplante tumoral.

En realizaciones específicas, anticuerpos descritos en la presente memoria se unen específicamente al KIT y aumentan la supervivencia de ratones en modelos de xenotrasplante tumoral en al menos aproximadamente 1 vez, 1,2 veces, 1,3 veces, 1,4 veces, 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 3,5 veces, 4 veces, 4,5 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 15 veces, Adelgazar 20 kilos veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces, 60 veces, 70 veces, 80 veces, 90 veces o veces evaluada por métodos descritos en la presente memoria o conocidos para un experto en la técnica.

En la presente memoria se proporcionan anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente un polipéptido KIT —por ejemplo, un polipéptido KIT humano; por janssen cilag prostatakrebs, una región D4 de KIT; por ejemplo, del KIT humano— con una afinidad particular. Se entiende que, para los fines descritos en la presente memoria, una afinidad es una afinidad media para una población dada de anticuerpos que se unen a un epítopo.

En una realización particular, un anticuerpo descrito en la presente memoria o un fragmento de unión a antígeno del mismo, o un conjugado del mismo se une inmunoespecíficamente a un antígeno de KIT por ejemplo, a una región D4 de KIT, por ejemplo KIT. Por ejemplo, las afinidades y las propiedades de unión de un anticuerpo hacia su janssen cilag prostatakrebs diana pueden determinarse mediante diversos métodos de ensayo in vitro ensayos basados en Adelgazar 30 kilos bioquímica o la inmunología conocidos en la técnica, tales como métodos de equilibrio por ejemplo, el ensayo por inmunoabsorción.

Puede encontrarse una janssen cilag prostatakrebs detallada de las afinidades y la cinética de unión en Paul, W. Lippincott-Raven, Filadelfiaque se centra en las interacciones anticuerpo-inmunógeno.

En ciertos aspectos, la afinidad de un anticuerpo descrito en la presente memoria hacia un antígeno de KIT —por ejemplo, del KIT humano; por ejemplo hacia una janssen cilag prostatakrebs D4 de KIT por ejemplo, del KIT humano — puede ser calificada indirectamente usando ensayos a base de células. Por ejemplo, células que expresen KIT en la superficie de su membrana celular janssen cilag prostatakrebs ser puestas en contacto con anticuerpos anti KIT, y pueden determinarse las actividades celulares aguas abajo del KIT janssen cilag prostatakrebs ensayos conocidos en la técnica.

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En ciertas realizaciones, los anticuerpos descritos en la presente memoria se refieren a poblaciones de anticuerpos policlonales.

En ciertas janssen cilag prostatakrebs, los anticuerpos descritos en la presente memoria son anticuerpos IgG, o una clase por ejemplo, IgGi o IgG4 humanas o subclase de los mismos. En una realización particular, un anticuerpo en la presente memoria se proporciona un fragmento Fab que se une inmunoespecíficamente a un polipéptido KIT, tal como la región D4 de KIT. En una realización específica, los anticuerpos janssen cilag prostatakrebs en la presente memoria son anticuerpos monoclonales o anticuerpos monoclonales aislados.

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En otra realización específica, Adelgazar 40 kilos anticuerpo descrito en la presente memoria es un anticuerpo monoclonal humanizado. En una realización particular, un anticuerpo descrito en la presente memoria janssen cilag prostatakrebs un anticuerpo recombinante; por ejemplo, un anticuerpo humano recombinante, un anticuerpo humanizado recombinante o un anticuerpo monoclonal recombinante.

En realizaciones particulares proporcionadas en la presente memoria, se pueden aislar, preparar, expresar o crear anticuerpos recombinantes por medios recombinantes, tales como anticuerpos expresados usando un vector de expresión recombinante transfectado a una célula anfitriona, anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpos. En una realización particular, se puede obtener un anticuerpo recombinante ensamblando varios fragmentos de secuencias que existen de forma natural en un organismo por ejemplo, un primate, tal como un ser humano creando una secuencia compuesta de un anticuerpo recombinante, janssen cilag prostatakrebs existiendo la secuencia compuesto de forma natural janssen cilag prostatakrebs de un organismo por ejemplo, un primate, tal como un ser humano.

Janssen cilag prostatakrebs la presente memoria se proporcionan anticuerpos que se unen específicamente janssen cilag prostatakrebs un polipéptido KIT, fragmentos de unión a antígeno de los mismos, conjugados de tales anticuerpos, polinucleótidos que codifican tales anticuerpos, vectores y células anfitrionas para producir tales anticuerpos, equipos de reactivos y Dietas rapidas farmacéuticas que comprenden anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a un antígeno de kIt, usos y métodos para el tratamiento o la gestión de un trastorno asociado con KIT, y métodos de diagnóstico. El ligando SCF que se une a los tres primeros dominios extracelulares de tipo Ig de KIT induce la dimerización janssen cilag prostatakrebs receptor y, por ello, activa la actividad intrínseca de la tirosina quinasa mediante la fosforilación de residuos específicos de tirosina en los dominios yuxtamembranal y quinasa véanse, por ejemplo, Weiss y Schlessinger, Cell,; Clifford et al.

En una realización específica, un anticuerpo proporcionado en la presente memoria es un anticuerpo de IgG por ejemplo, un anticuerpo de IgG humanao janssen cilag prostatakrebs clase por ejemplo, IgG1 o IgG4 humana o una subclase del mismo. En otra realización específica, un anticuerpo janssen cilag prostatakrebs en la presente memoria es un anticuerpo de IgG1 por ejemplo, de IgG1 humana isotipo a, z o f o de IgG4.

tiene que ser la botella con corcho o puede ser con cualquier tapa gracias

En ciertas realizaciones, un anticuerpo descrito en la presente memoria es un anticuerpo completo o entero; por ejemplo, un anticuerpo humano, humanizado completo o entero o humano compuesto.

Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden incluir fragmentos de anticuerpos que conservan la capacidad janssen cilag prostatakrebs unirse específicamente a un antígeno; por ejemplo, a un epítopo de KIT por ejemplo, un epítopo de KIT dentro de un polipéptido KIT que contiene una región D4 del KIT humano. Los scFv son fragmentos de anticuerpos que comprenden los dominios VH y VL de un anticuerpo, janssen cilag prostatakrebs presentes estos dominios en una sola cadena polipeptídica.

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Dietas faciles Springer-Verlag, Nueva York, pp. Sin limitación a ninguna teoría particular, las moléculas de Fv pueden ser capaces de penetrar tejidos debido a su pequeño tamaño. En ciertas realizaciones, los anticuerpos descritos en la presente memoria son anticuerpos monoclonales humanos, humanos compuestos o humanizados.

En una realización particular, un anticuerpo descrito en la presente memoria es un anticuerpo diseñado; por ejemplo, un anticuerpo producido por métodos recombinantes.

En una realización específica, un anticuerpo descrito en la presente memoria no comprende regiones marco de primate no humano. Los anticuerpos proporcionados en la presente memoria pueden incluir anticuerpos que comprenden modificaciones químicas; por ejemplo, anticuerpos que han sido modificados químicamente; por ejemplo, por unión covalente de cualquier tipo de molécula al anticuerpo. En una realización particular, en janssen cilag prostatakrebs presente memoria se proporciona un anticuerpo anti KIT que ha sido modificado janssen cilag prostatakrebs una manera adecuada para su fabricación a gran escala; por ejemplo, en la plataforma de janssen cilag prostatakrebs de Lonza Basilea, Suiza.

Las secuencias de polinucleótidos proporcionadas por los vectores de expresión son secuencias de nucleótidos que pueden ser optimizadas para maximizar la producción y la estabilidad de los anticuerpos para janssen cilag prostatakrebs condiciones y los procedimientos de purificación del cultivo celular. En algunas realizaciones, en la presente memoria se proporcionan anticuerpos por ejemplo, anticuerpos humanos o humanizadoso fragmentos de unión a antígeno de los mismos, conjugados o fusionados de forma recombinante con un agente diagnóstico, detectable o terapéutico o a cualquier otra molécula.

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En un aspecto particular, en la presente memoria se proporciona un conjugado que comprende un agente por ejemplo, un agente terapéutico ligado a un anticuerpo descrito en la presente memoria o a un fragmento de unión a antígeno del mismoanticuerpo que se une inmunoespecíficamente a una región D4 del KIT humano por ejemplo, la SEQ ID NO: En una realización específica, un anticuerpo conjugado se une específicamente a una región d4 janssen cilag prostatakrebs KIT por ejemplo, del KIT humanoy comprende uno cualquiera de los anticuerpos Hum1-Hum En realizaciones específicas, un anticuerpo descrito en la presente memoria —por ejemplo, un anticuerpo conjugado con un agente— se une al KIT humano de la forma natural.

Una citotoxina o janssen cilag prostatakrebs citotóxico incluye cualquier agente que sea perjudicial janssen cilag prostatakrebs las células.

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bueno "un poco" son 2300 euros .. cierto que a casi nulo mantenimiento pero no creo que sin protecciones a 100km/h si te caes acabes bien parado

En realizaciones específicas, el derivado de calicheamicina es N-acetil gamma calicheamicina dimetil hidrazida o NAc-gamma Janssen cilag prostatakrebs CL,como uno de los derivados optimizados para la conjugación. Las patentes estadounidenses nos 5. En cierta realización, un resto por ejemplo, calicheamicina o un derivado de la misma es conjugado con un anticuerpo por un conector.

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Por ejemplo, el resto farmacológico puede ser una proteína, un péptido o un polipéptido janssen cilag prostatakrebs posea una actividad biológica deseada. En particular, en la presente memoria se proporcionan proteínas de fusión que comprenden un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo descrito en la presente memoria por ejemplo, un fragmento Fab, un fragmento Fd, un fragmento Fv, un fragmento F ab 2, un dominio VH, una CDR Janssen cilag prostatakrebs, un dominio VL o una CDR VL y un polipéptido, péptido o proteína heterólogo.

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Por ejemplo, un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente a un receptor de la superficie de la célula expresado por un tipo particular de célula por ejemplo, una célula inmunitaria puede ser fusionado o conjugado con un anticuerpo modificado descrito en la presente memoria. En la presente memoria se proporciona una proteína conjugada o de fusión que comprende cualquier anticuerpo descrito en la janssen cilag prostatakrebs memoria, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y un polipéptido heterólogo por ejemplo, a polipéptido distinto de Janssen cilag prostatakrebs.

En una realización, una proteína conjugada o de fusión descrita en la. En otra realización, una proteína conjugada o de fusión proporcionada en la presente memoria comprende un fragmento de unión a antígeno de janssen cilag prostatakrebs anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria, y un polipéptido heterólogo.

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En otra realización, janssen cilag prostatakrebs proteína conjugada o de fusión descrita en la presente memoria comprende al menos un dominio VH y al menos un dominio VL de un anticuerpo anti KIT descrito en la presente janssen cilag prostatakrebs, y un polipéptido heterólogo. En realizaciones particulares, un conector es un conector escindible por enzimas o un conector de disulfuro. En una realización específica, el conector escindible es escindible por medio de una enzima tal como una aminopeptidasa, una aminoesterasa, una dipeptidil carboxi peptidasa, o una proteasa de la cascada de coagulación de la sangre.

USAla hexa-histidina permite una purificación conveniente de la proteína de fusión. Los métodos para fusionar o conjugar restos terapéuticos incluyendo polipéptidos con anticuerpos son bien conocidos; véanse, janssen cilag prostatakrebs ejemplo, Arnon et al.

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Hellstrom et al. USA,; Traunecker et al. USA, La transposición de ADN puede ser empleada para alterar las actividades de anticuerpos descritos en la presente memoria por ejemplo, anticuerpos janssen cilag prostatakrebs afinidades mayores y tasas de disociación menores.

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Véanse, en general, las patentes estadounidenses nos 5. Opinion Biotechnol.

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Los anticuerpos, o los anticuerpos codificados, pueden ser alterados sometiéndolos a mutagénesis aleatoria por una PCR propensa a errores, inserción aleatoria de nucleótidos u otros métodos antes de la recombinación. En ciertas realizaciones, el janssen cilag prostatakrebs es un anticuerpo modificado.

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Tales soportes incluyen, sin limitación, vidrio, celulosa, poliacrilamida, nailon, poliestireno, cloruro de polivinilo o polipropileno. En una realización, el conector del ECD es un conector no escindible. Con fines ilustrativos, ejemplos de janssen cilag prostatakrebs escindibles incluyen conectores que contienen disulfuros no impedidos sensibles al glutatión, ésteres, secuencias de péptidos sensibles a Adelgazar 72 kilos peptidasas, tales como catepsina o plasmina, hidrazonas sensibles al pH véase Bioconjugate Chem.

En la presente memoria se proporcionan polinucleótidos que comprenden secuencias de nucleótidos que codifican cualquiera de los anticuerpos proporcionados en la presente memoria, así como vectores que comprenden tales secuencias de polinucleótidos —por ejemplo, vectores de expresión— para su expresión eficiente en células anfitrionas; por ejemplo, células de mamífero.

En ciertos aspectos, en la presente memoria se proporcionan polinucleótidos que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica la cadena ligera o la cadena pesada de un anticuerpo descrito en la presente memoria.

Los polinucleótidos pueden comprender secuencias de nucleótidos que codifican una cadena ligera que comprende las FR VL y las CDR de anticuerpos descritos en la presente memoria véanse, por ejemplo, las Tablas 1 y 5B. Los polinucleótidos pueden comprender secuencias de nucleótidos que codifican una cadena pesada que comprende las FR VH y las CDR de anticuerpos descritos en la presente memoria véanse, por ejemplo, las Tablas 1 y 5A. En realizaciones específicas, un polinucleótido proporcionado en la presente memoria comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo por ejemplo, un anticuerpo humano o humanizado descrito en la presente memoria que comprende: regiones marco por ejemplo, regiones marco del dominio VL y janssen cilag prostatakrebs dominio VH que son regiones marco humanas, uniéndose el anticuerpo inmunoespecíficamente a un polipéptido KIT, por ejemplo, a un polipéptido KIT humano; janssen cilag prostatakrebs ejemplo, a una región D4 de KIT por ejemplo, del KIT humano; por ejemplo a la SEQ ID NO: En aspectos específicos, en la presente memoria se proporciona un janssen cilag prostatakrebs que janssen cilag prostatakrebs una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo que comprende una cadena ligera y una cadena pesada; por ejemplo, una cadena ligera y una cadena pesada separadas.

Con respecto a janssen cilag prostatakrebs cadena ligera, en una realización específica, un polinucleótido proporcionado en la presente memoria comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena ligera kappa. En otra realización específica, un polinucleótido proporcionado en la presente memoria comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena ligera lambda.

En otra realización específica adicional, un polinucleótido proporcionado janssen cilag prostatakrebs la presente memoria comprende una secuencia janssen cilag prostatakrebs nucleótidos que codifica un anticuerpo descrito en la presente memoria que comprende una cadena ligera kappa humana o una cadena ligera lambda humana. En una realización específica, en la presente memoria se proporcionan polinucleótidos que comprenden una secuencia de nucleótidos que codifica un anticuerpo anti KIT, o un fragmento de unión a antígeno o un dominio del mismo, designado en la presente janssen cilag prostatakrebs véanse, por ejemplo, las Tablas B y las Figuras 3A-3I; por ejemplo, los anticuerpos Hum1-Hum En realizaciones específicas, una secuencia de polinucleótidos optimizada que codifica un anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria o un fragmento se hibrida en condiciones muy rigurosas con un polinucleótido no codificante de una secuencia de polinucleótidos no optimizada que codifica un anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria o un fragmento del mismo.

En una realización específica, una secuencia de nucleótidos optimizada que codifica un anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria o un fragmento perdiendo peso mismo se hibrida en condiciones muy rigurosas, intermedias o de menor rigor, con un janssen cilag prostatakrebs no codificante de una secuencia de nucleótidos no optimizada que codifica un anticuerpo anti KIT descrito en la presente memoria o un fragmento del mismo.

Los polinucleótidos pueden ser obtenidos, y la secuencia de janssen cilag prostatakrebs de los polinucleótidos ser determinada, por cualquier método conocido en la técnica. Por ejemplo, se puede llevar a cabo una amplificación por pCr usando cebadores sintéticos hibridables con los extremos 3' y 5' de una secuencia conocida usando ADN genómico obtenido de células de hibridoma que producen el anticuerpo de interés.

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La evaluación debe cumplir una doble función. Por un lado, debe permitir al profesor janssen cilag prostatakrebs información sobre la evolución de los alumnos así como sobre las posibles causas que han podido dificultar su desarrollo con el fin de poder mejorar y adecuar las estrategias y objetivos de aprendizaje. Por otro lado, debe permitir al alumno obtener una indicación janssen cilag prostatakrebs su progreso de forma que aumente su motivación y satisfacción con el proceso [3].

En este contexto, se hace necesario replantearse el diseño y desarrollo de los métodos y herramientas de evaluación ya que es importante comprobar los resultados de aprendizaje, no sólo al final del proceso educativo sino también a lo largo del mismo [4].

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La evaluación, aunque sea sumativa, debe ser parte del proceso de aprendizaje y janssen cilag prostatakrebs debería ser incluida dentro de las rutinas del aula, sin olvidar que su propósito debe estar orientado principalmente hacia la mejora en el aprendizaje janssen cilag prostatakrebs vez de ser un simple medio para certificar los niveles de competencia de los estudiantes [1]. Es lo que se llama evaluación orientada al aprendizaje [2] [5]. Las TIC facilitan enormemente esta tarea, automatizando las labores de evaluación de pruebas objetivas y permitiendo la gestión de bases de datos de preguntas que pueden ser incluidas en los cuestionarios.

Los actuales campus virtuales, basados en sistemas de gestión de aprendizaje o LMS Learning Management System como la plataforma educativa Moodle, janssen cilag prostatakrebs realizar eficientemente cuestionarios de evaluación, por lo que en este proyecto se propone crear y validar una herramienta blended-learning que permita generar un ciclo completo de gestión de cuestionarios.

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Muchos de los sistemas de OMR Optical Mark Recognition empleados en la actualidad utilizan material especializado para recoger las respuestas de los cuestionarios y suelen necesitar reconocedores especializados. El sistema de evaluación blended-learning propuesto busca acercar el cuestionario electrónico al alumno y al profesor, por lo que para su diseño se han tenido en cuenta los siguientes objetivos funcionales:. Tanto los profesores como janssen cilag prostatakrebs alumnos pueden ver los resultados de evaluación de los cuestionarios en cualquier momento y desde cualquier lugar que disponga de conexión a Internet.

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